IMPDH2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-410835-LAC

IMPDH2 codifica l’inosina-5′-monofosfato deidrogenasi 2, un enzima limitante della velocità nella via di biosintesi de novo dei nucleotidi guaninici che converte l’IMP in XMP, sostenendo le riserve cellulari di GMP e GTP. Controllando la disponibilità di nucleotidi, IMPDH2 influenza la sintesi di DNA e RNA, la progressione del ciclo cellulare e l’adattamento metabolico durante la proliferazione e l’attivazione immunitaria. La sua attività collega il metabolismo delle purine alla capacità trascrizionale e traduzionale, con effetti a valle sullo stress replicativo e sulla funzione mitocondriale. Un’espressione disregolata di IMPDH2 o un’alterazione del flusso attraverso la sintesi dei nucleotidi guaninici è stata associata a fenotipi proliferativi e a una funzione alterata delle cellule immunitarie, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio delle dipendenze metaboliche in modelli cellulari pertinenti alla malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale IMPDH2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di IMPDH2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale IMPDH2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione IMPDH2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di IMPDH2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo IMPDH2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.