ILDR1 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-430649-ACT-2

マウスIldr1は、免疫グロブリン様ドメイン含有受容体1（ILDR1）をコードしており、ILDR1は一回膜貫通型タンパク質として三細胞接着部位のタイトジャンクションに多く局在し、上皮バリア構造の構築を助けるとともに傍細胞透過性を調節する。ILDR1は、頂端—基底極性や膜タンパク質トラフィッキングに関連するジャンクションの組み立てやシグナル伝達過程に関与し、感覚組織および上皮組織における協調的な細胞—細胞接着を支える。ILDR1機能の破綻はタイトジャンクションの異常や聴覚の病態生理と関連することから、Ildr1は難聴や上皮バリア機能障害の機序解明を研究するうえで重要な標的である。マウスIldr1の遺伝子編集により、三細胞ジャンクション生物学、組織特異的なバリア制御、ならびに感覚上皮の発生モデルや疾患関連ストレス応答モデルにおける下流のトランスクリプトーム／プロテオーム変化を、in vivoおよびin vitroで解析できるようになる。

ILDR1 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ildr1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ILDR1 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Ildr1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIldr1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ILDR1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIldr1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるILDR1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIldr1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるILDR1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。