IL-8RA Plasmide Double Nickase (h): sc-401645-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IL-8RA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IL-8RA Double Nickase Plasmid (h) e il IL-8RA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CXCR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: IL-8RA Antibody (B-1): sc-7303
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IL-8RA Plasmide Double Nickase (h) | sc-401645-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IL-8RA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401645-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CXCR1 codifica il recettore alfa dell’interleuchina-8 (IL-8RA), un GPCR a sette eliche transmembrana che lega chemiochine CXC ELR+ come CXCL8/IL-8 per coordinare la chemiotassi, l’adesione, la degranulazione e il burst ossidativo dei neutrofili. In seguito al legame con il ligando, IL-8RA si accoppia a proteine G attivando la via PLCβ/flusso di Ca²⁺, PI3K–AKT, MAPK/ERK e la segnalazione delle piccole GTPasi, modulando il rimodellamento del citoscheletro e la migrazione direzionale. L’attività di CXCR1 si integra con la sorveglianza immunitaria innata e con le reti di citochine infiammatorie, influenzando il traffico leucocitario nei tessuti infetti o danneggiati. Una segnalazione disregolata di CXCR1 è stata associata a condizioni infiammatorie croniche e all’infiammazione associata ai tumori, attraverso effetti sul reclutamento delle cellule mieloidi e sui microambienti infiammatori.
IL-8RA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CXCR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CXCR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CXCR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CXCR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.