IGFBP4 Plasmide Double Nickase (m): sc-421065-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- IGFBP4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il IGFBP4 Double Nickase Plasmid (m) e il IGFBP4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Igfbp4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
IGFBP4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421065-NIC | 20 µg | $410.00 |
Igfbp4 codifica la proteina legante il fattore di crescita insulino-simile 4 (IGFBP4), un regolatore secreto della biodisponibilità degli IGF che modula le interazioni di IGF1/IGF2 con i recettori degli IGF e influenza a valle le vie di segnalazione PI3K–AKT e MAPK. Sequestrando gli IGF e plasmando gradienti locali di fattori di crescita, IGFBP4 contribuisce al controllo della proliferazione, della differenziazione e della sopravvivenza cellulare, nonché del rimodellamento tissutale. Nella biologia del topo, Igfbp4 viene studiato in contesti quali l’omeostasi vascolare e cardiaca, lo sviluppo scheletrico e la regolazione riproduttiva e metabolica, dove la segnalazione IGF è un determinante chiave degli esiti fenotipici. Un’attività deregolata dell’asse IGFBP4/IGF è stata associata a processi rilevanti per la malattia, tra cui fibrosi, angiogenesi e controllo aberrante della crescita, rendendo Igfbp4 un locus utile per studi meccanicistici delle vie di segnalazione.
IGFBP4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Igfbp4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Igfbp4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Igfbp4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Igfbp4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.