IFN-β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-418564-ACT

IFNB1 codifica l’interferone‑β umano (IFN‑β), un interferone di tipo I rapidamente indotto a valle dei recettori di riconoscimento del patogeno che rilevano acidi nucleici virali e citosolici. L’IFN‑β secreto attiva la segnalazione JAK–STAT dipendente da IFNAR, inducendo la trascrizione dei geni stimolati dagli interferoni e plasmando la difesa antivirale, la presentazione dell’antigene e il crosstalk tra immunità innata e adattativa. IFNB1 è integrato con i nodi di segnalazione IRF3/IRF7, NF‑κB e cGAS–STING/TBK1, che coordinano programmi genici infiammatori e risposte allo stress cellulare. Una segnalazione dell’IFN‑β deregolata è implicata in fenotipi autoinfiammatori e interferonopatie e contribuisce al rimodellamento immunitario nell’infezione cronica e nell’infiammazione associata ai tumori, rendendo IFNB1 un asse ampiamente utilizzato negli studi di immunologia meccanicistica.

IFN-β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFNB1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFN-β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFNB1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFNB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFN-β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFNB1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFN-β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFN-β nelle cellule tumorali con espressione di IFNB1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.