IFN-αB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421046

Panoramica

Ifnab nel topo codifica l’interferone-αB (IFN-αB), un interferone di tipo I che amplifica le difese antivirali innate e modella le successive risposte immunitarie adattative. In seguito all’attivazione dei recettori di riconoscimento dei pattern tramite vie quali cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS e i TLR endosomiali, IFN-αB si lega a IFNAR per attivare la segnalazione JAK–STAT e indurre la trascrizione dei geni stimolati dall’interferone (ISG), che modulano la presentazione dell’antigene, l’apoptosi e le reti di citochine infiammatorie. Un’attività disregolata degli interferoni di tipo I è implicata nell’infiammazione cronica e nell’autoimmunità, e firme interferoniche alterate vengono spesso analizzate in modelli di infezione virale e di patologia immunomediata. La funzione di Ifnab è quindi rilevante per studi sulle interazioni ospite–patogeno, sulla programmazione delle cellule mieloidi e linfoidi e sulle risposte tissutali guidate dagli interferoni.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IFN-αB (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ifnab in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ifnab insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ifnab a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IFN-αB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ifnab per lo studio della segnalazione di IFN-αB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ifnab critici per la funzione di IFN-αB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ifnab per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IFN-αB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal IFN-αB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ifnab. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IFN-αB Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR IFN-αB (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ifnab per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ifnab definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.