Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ICSBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421016
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ICSBP Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ICSBP, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ICSBP Antibody (E-9): sc-365042
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ICSBP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-421016 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene Irf8 del topo codifica il fattore di trascrizione ICSBP (interferon consensus sequence-binding protein), un regolatore delle linee ematopoietiche che coordina la differenziazione e la maturazione funzionale delle cellule mieloidi e dendritiche. ICSBP integra i programmi trascrizionali guidati dagli interferoni con la segnalazione dell’immunità innata per modulare la presentazione dell’antigene, le risposte citochiniche infiammatorie e la difesa antimicrobica, e interagisce con vie che controllano lo sviluppo dei fagociti mononucleati e l’omeostasi immunitaria. Un’alterata attività di IRF8/ICSBP è associata a mielopoiesi deregolata, funzione compromessa delle cellule dendritiche e stati infiammatori aberranti, rendendolo un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici sullo sviluppo immunitario e sulla risposta dell’ospite.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ICSBP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Irf8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Irf8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Irf8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ICSBP.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Irf8 per lo studio della segnalazione di ICSBP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Irf8 critici per la funzione di ICSBP
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Irf8 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ICSBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ICSBP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Irf8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ICSBP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ICSBP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Irf8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Irf8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.