Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
ICSBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421016
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ICSBP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ICSBP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ICSBP Anticuerpo (E-9): sc-365042
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ICSBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421016 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Irf8 de ratón codifica el factor de transcripción ICSBP (proteína de unión a secuencias consenso de interferón), un regulador del linaje hematopoyético que coordina la diferenciación y la maduración funcional de células mieloides y dendríticas. ICSBP integra programas transcripcionales inducidos por interferón con la señalización de la inmunidad innata para modular la presentación de antígenos, las respuestas de citocinas inflamatorias y la defensa antimicrobiana, y se interrelaciona con vías que controlan el desarrollo de fagocitos mononucleares y la homeostasis inmunitaria. La actividad alterada de IRF8/ICSBP se asocia con mielopoyesis desregulada, función deficiente de células dendríticas y estados inflamatorios aberrantes, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos del desarrollo inmunitario y la respuesta del hospedador.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ICSBP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Irf8 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Irf8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Irf8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ICSBP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Irf8 para la investigación de la señalización de ICSBP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Irf8 críticos para la función de ICSBP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Irf8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ICSBP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ICSBP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Irf8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ICSBP (m) y el plásmido HDR ICSBP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Irf8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Irf8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.