HSPA5/BiP/GRP78 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400073-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- HSPA5/BiP/GRP78 CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- HSPA5/BiP/GRP78 CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom HSPA5/BiP/GRP78 CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom HSPA5/BiP/GRP78 CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der HSPA5-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HSPA5/BiP/GRP78: sc-13539
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HSPA5/BiP/GRP78 CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-400073-ACT | 20 µg | $397.00 |
HSPA5 kodiert das endoplasmatische Retikulum(ER)-Chaperon BiP/GRP78, einen zentralen Regulator der Proteinfaltung, der ER-Qualitätskontrolle und der Proteostase. HSPA5 bindet neu synthetisierte Polypeptide und fehlgefaltete Proteine, koordiniert den ER-assoziierten Abbau (ERAD) und moduliert die Signalübertragung der Unfolded-Protein-Response (UPR) über Schlüsselsensoren wie PERK, IRE1 und ATF6. Durch die Verknüpfung von ER-Stress mit der Calcium-Homöostase, dem Redox-Gleichgewicht und der Durchsatzleistung des sekretorischen Weges beeinflusst HSPA5 das Zellüberleben und die metabolische Anpassung. Eine fehlregulierte HSPA5-Expression und UPR-Aktivierung werden mit Stresstoleranz in Krebszellen, neurodegenerativen Proteinopathien, diabetesassoziiertem ER-Stress und entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht.
HSPA5/BiP/GRP78 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HSPA5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
HSPA5/BiP/GRP78 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HSPA5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HSPA5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HSPA5/BiP/GRP78-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HSPA5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HSPA5/BiP/GRP78-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HSPA5/BiP/GRP78-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HSPA5-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.