Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
HRI Plasmide Double Nickase (h): sc-403442-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HRI Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HRI Double Nickase Plasmid (h) e il HRI Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EIF2AK1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HRI Antibody (D-12): sc-365239
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HRI Plasmide Double Nickase (h) | sc-403442-NIC | 20 µg | $410.00 |
EIF2AK1 codifica l’inibitore regolato dall’eme (HRI), una chinasi di eIF2α sensibile allo stress che fosforila EIF2S1 per modulare l’inizio della traduzione e la risposta integrata allo stress (ISR). In contesti eritroidi e non eritroidi, HRI collega la disponibilità di eme, lo stress ossidativo e lo stress proteotossico all’attenuazione della sintesi proteica globale, promuovendo al contempo programmi trascrizionali adattativi come la segnalazione di ATF4. Questa regolazione influisce sulla proteostasi, sull’omeostasi redox e sulle vie di stress mitocondriali e citosoliche che determinano la sopravvivenza cellulare in condizioni di fluttuazioni di nutrienti e di ferro/eme. La deregolazione della segnalazione EIF2AK1–eIF2α è stata studiata nello stress eritropoietico associato all’anemia, nei difetti di proteostasi legati alla neurodegenerazione e nell’adattamento delle cellule tumorali allo stress del microambiente.
HRI Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EIF2AK1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EIF2AK1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EIF2AK1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EIF2AK1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.