HPK1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402367-ACT

Il gene umano MAP4K1 codifica la hematopoietic progenitor kinase 1 (HPK1), una chinasi serina/treonina che funge da regolatore a monte delle reti di segnalazione a valle dei recettori dell’antigene e delle citochine. HPK1 integra input provenienti da complessi prossimali ai recettori immunitari per modulare le cascate MAPK e i programmi trascrizionali associati a NF-κB, determinando le soglie di attivazione, la durata del segnale e gli stati di fosforilazione proteica. Attraverso queste vie, MAP4K1 influenza processi cellulari quali la segnalazione recettoriale, la regolazione trascrizionale e le dinamiche di segnalazione responsiva allo stress. Attività e pattern di espressione deregolati di HPK1 sono studiati nel contesto di squilibri della segnalazione immunitaria e della biologia associata all’infiammazione, con ulteriore rilevanza per le interazioni tumore–sistema immunitario nella ricerca oncologica.

HPK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAP4K1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HPK1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAP4K1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAP4K1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HPK1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAP4K1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HPK1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HPK1 nelle cellule tumorali con espressione di MAP4K1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.