HPK1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402367-ACT

ヒトMAP4K1は造血系前駆細胞キナーゼ1（HPK1）をコードしており、抗原受容体およびサイトカイン受容体の下流にあるシグナル伝達ネットワークを上流で制御するセリン／スレオニンキナーゼとして機能します。HPK1は、免疫受容体近傍の複合体からの入力を統合してMAPKカスケードやNF-κB関連の転写プログラムを調節し、活性化閾値、シグナル持続時間、タンパク質リン酸化状態を形作ります。これらの経路を介して、MAP4K1は受容体シグナル伝達、転写制御、ストレス応答性のシグナル動態といった細胞プロセスに影響を与えます。HPK1の活性や発現パターンの破綻は、免疫シグナルの不均衡や炎症関連の生物学という文脈で研究されており、がん研究における腫瘍—免疫相互作用にも関連します。

HPK1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAP4K1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HPK1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAP4K1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAP4K1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HPK1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAP4K1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHPK1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAP4K1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHPK1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。