HoxB4 Plasmide Double Nickase (h): sc-404013-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HoxB4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HoxB4 Double Nickase Plasmid (h) e il HoxB4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HOXB4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HoxB4 Antibody (D-1): sc-365927
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HoxB4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404013-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HoxB4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404013-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HOXB4 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxB4, un regolatore che si lega al DNA e che organizza l’asse antero‑posteriore e specifica l’identità cellulare durante lo sviluppo embrionale attraverso il controllo di programmi di espressione genica determinanti per la linea cellulare. Nei tessuti adulti, l’attività di HoxB4 è associata all’autorinnovamento e alla differenziazione delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche, integrandosi con reti trascrizionali di tipo sviluppo‑dipendente che includono cofattori HOX e complessi di modifica della cromatina. Un’espressione deregolata di HOXB4 è stata riportata in neoplasie ematologiche e in altri tumori, dove un controllo trascrizionale alterato può contribuire a proliferazione aberrante e a una differenziazione compromessa. Poiché HoxB4 agisce come regolatore maestro, perturbare HOXB4 rappresenta un punto di accesso pratico per studiare i circuiti trascrizionali, le transizioni dello stato epigenetico e la riattivazione di vie di sviluppo in modelli di malattia.
HoxB4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HOXB4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HOXB4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HOXB4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HOXB4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.