HoxA3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404634

Panoramica

HOXA3 codifica il fattore di trascrizione homeobox HoxA3, un regolatore che si lega al DNA in modo specifico per la sequenza e che definisce l’identità antero-posteriore durante l’embriogenesi, coordinando programmi che governano la morfogenesi, la differenziazione epiteliale e il rimodellamento tissutale. HoxA3 si integra nelle reti regolatorie del cluster HOX e interseca vie di segnalazione dello sviluppo come WNT, BMP/TGF-β e l’acido retinoico, contribuendo a determinare le scelte di destino cellulare e l’espressione genica nello spazio. In contesti adulti, un’alterata espressione di HOXA3 o una sua disregolazione epigenetica è stata associata a stati di differenziazione aberranti e a una riprogrammazione trascrizionale osservata nel cancro e in altri disturbi che coinvolgono la riattivazione di geni dello sviluppo. In quanto regolatore nucleare, HoxA3 è spesso studiato nella mappatura delle reti di regolazione genica, nei modelli di specificazione di linea e nel controllo della trascrizione mediato dalla cromatina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HoxA3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HOXA3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HOXA3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HOXA3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HoxA3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HOXA3 per lo studio della segnalazione di HoxA3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HOXA3 critici per la funzione di HoxA3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HOXA3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HoxA3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HoxA3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HOXA3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HoxA3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HoxA3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HOXA3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HOXA3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.