HoxA1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403158-ACT

HOXA1 codifica il fattore di trascrizione homeobox umano HoxA1, un regolatore che si lega al DNA in modo sequenza-specifico e che contribuisce a definire precocemente l’asse antero-posteriore, guidando lo sviluppo del rombencefalo e delle strutture cranio-facciali. Attraverso il controllo dei programmi di specificazione di linea, HOXA1 influenza reti trascrizionali che intersecano la segnalazione responsiva all’acido retinoico e più ampi processi di differenziamento regolati dalla cromatina. Un’espressione deregolata di HOXA1 è stata associata ad alterazioni degli stati di espressione genica durante lo sviluppo ed è stata indagata in contesti di malformazioni congenite e di riprogrammazione trascrizionale oncogenica. In quanto regolatore dello sviluppo, HOXA1 è ampiamente utilizzato come marcatore e come nodo meccanicistico per studiare le transizioni di destino cellulare e la patterning guidata da morfogeni.

HoxA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HOXA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HoxA1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HOXA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HOXA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HoxA1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HOXA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HoxA1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HoxA1 nelle cellule tumorali con espressione di HOXA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.