HOOK1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404872-ACT

Humanes HOOK1 kodiert ein mikrotubuli-bindendes Adapterprotein, das Dynein–Dynactin-Motoren mit endosomaler und organellärer Fracht verbindet und so den zum Minusende gerichteten Transport sowie die räumliche Organisation des Membrantransports unterstützt. Über seine Funktion in mikrotubuliabhängiger Dynamik trägt HOOK1 zu zentrosomenassoziierten Prozessen, zur Assemblierung und Aufrechterhaltung von Zilien sowie zur Koordination von Endosom-zu-Golgi-Transportwegen bei. Störungen des durch HOOK1 regulierten Transports können die Zellpolarität, den mitotischen Verlauf und die Kompartimentierung von Signalen beeinflussen, was HOOK1 für Studien zur neuroentwicklungsbiologischen Forschung, zu Mechanismen von Ziliopathien und zu fehlreguliertem intrazellulärem Transport in unterschiedlichen Krankheitskontexten relevant macht. Eine veränderte HOOK1-Expression oder -Funktion wurde zudem im Zusammenhang mit dem Verhalten von Tumorzellen und mit Wegen der Genomstabilität untersucht, die von einer korrekten zytoskelettalen Organisation abhängen.

HOOK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HOOK1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HOOK1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HOOK1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HOOK1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HOOK1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HOOK1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HOOK1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HOOK1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HOOK1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.