HOOK1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404872-ACT

O HOOK1 humano codifica uma proteína adaptadora de ligação a microtúbulos que conecta os motores dineína–dinactina a cargas endossomais e de organelos, sustentando o transporte dirigido para a extremidade menos e a organização espacial do tráfego de membranas. Por meio do seu papel na dinâmica dependente de microtúbulos, o HOOK1 contribui para processos associados ao centrossoma, para a montagem e manutenção de cílios e para a coordenação de vias de tráfego de endossomas para o Golgi. A perturbação do transporte regulado por HOOK1 pode influenciar a polaridade celular, a progressão mitótica e a compartimentalização de sinais, tornando-o relevante para estudos de biologia do neurodesenvolvimento, mecanismos relacionados a ciliopatias e desregulação do tráfego intracelular observada em diversos contextos de doença. Alterações na expressão ou na função de HOOK1 também têm sido investigadas em relação ao comportamento de células tumorais e a vias de estabilidade genômica que dependem de uma organização adequada do citoesqueleto.

HOOK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HOOK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HOOK1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HOOK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HOOK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HOOK1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HOOK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HOOK1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HOOK1 em células tumorais com expressão de HOOK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.