hnRNP H3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404805-ACT

HNRNPH3 codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea umana H3 (hnRNP H3), una proteina legante l’RNA che si associa ai trascritti nascenti e regola il processamento del pre‑mRNA. hnRNP H3 contribuisce alla selezione dei siti di splicing e ai programmi di splicing alternativo attraverso il riconoscimento di elementi di RNA ricchi in G, influenzando l’equilibrio delle isoforme trascrittomiche, la maturazione dell’RNA e le reti di espressione genica a valle. Come parte di complessi ribonucleoproteici legati al processamento co-trascrizionale dell’RNA, interagisce con vie che regolano l’esportazione dell’mRNA, la stabilità e la competenza per la traduzione. La disregolazione dei fattori di splicing della famiglia hnRNP è spesso studiata nel contesto dell’uso anomalo di isoforme osservato in diversi tumori e in modelli di malattie neurologiche, rendendo HNRNPH3 rilevante per indagare fenotipi guidati dal processamento dell’RNA.

hnRNP H3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HNRNPH3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

hnRNP H3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HNRNPH3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HNRNPH3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di hnRNP H3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HNRNPH3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da hnRNP H3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via hnRNP H3 nelle cellule tumorali con espressione di HNRNPH3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.