hnRNP H3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404805-ACT

HNRNPH3 は、ヒトのヘテロ核リボヌクレオタンパク質 H3（hnRNP H3）をコードしており、新生転写産物に結合して pre-mRNA のプロセシングを制御する RNA 結合タンパク質です。hnRNP H3 は、G リッチな RNA 配列要素の認識を介してスプライス部位の選択や選択的スプライシングプログラムに寄与し、転写産物アイソフォームのバランス、RNA の成熟、ならびに下流の遺伝子発現ネットワークに影響を与えます。共転写的 RNA プロセシングに関連するリボヌクレオタンパク質複合体の一部として、mRNA の核外輸送、安定性、翻訳能を規定する経路とも連携します。hnRNP ファミリーのスプライシング因子の機能異常は、がんや神経疾患モデルで観察される異常なアイソフォーム利用との関連で頻繁に研究されており、HNRNPH3 は RNA プロセシング駆動性の表現型を解析するうえで重要な対象となります。

hnRNP H3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HNRNPH3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

hnRNP H3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HNRNPH3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHNRNPH3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性hnRNP H3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHNRNPH3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるhnRNP H3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHNRNPH3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるhnRNP H3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。