hnRNP A/B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420896

Panoramica

Hnrnpab codifica la ribonucleoproteina nucleare eterogenea A/B (hnRNP A/B) del topo, una proteina legante l’RNA che si associa ai trascritti nascenti per regolare lo splicing del pre-mRNA, la selezione alternativa degli esoni, la stabilita dell’mRNA e il trasporto nucleo-citoplasmatico. hnRNP A/B partecipa alla regolazione genica co- e post-trascrizionale all’interno di complessi ribonucleoproteici e contribuisce a coordinare la dinamica del trascrittoma durante la proliferazione e la differenziazione cellulare. Attraverso i suoi ruoli nell’elaborazione dell’RNA e nel controllo post-trascrizionale, l’alterazione della funzione di hnRNP A/B puo influenzare vie collegate alle risposte allo stress, al mantenimento del genoma e alla proteostasi. Un’attivita deregolata della famiglia hnRNP e stata associata a un metabolismo dell’RNA alterato nel cancro e nella neurodegenerazione, rendendo Hnrnpab un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO hnRNP A/B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hnrnpab in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hnrnpab insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hnrnpab a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina hnRNP A/B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hnrnpab per lo studio della segnalazione di hnRNP A/B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hnrnpab critici per la funzione di hnRNP A/B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hnrnpab per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal hnRNP A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal hnRNP A/B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hnrnpab. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal hnRNP A/B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR hnRNP A/B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hnrnpab per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hnrnpab definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.