HNF-3α Plasmide Double Nickase (h): sc-400743-NIC

FOXA1 (HNF-3α) è un fattore di trascrizione pioniere della famiglia winged-helix che si lega alla cromatina compattata per stabilire l’accessibilità regolatoria e coordinare programmi trascrizionali specifici di linea nei tessuti epiteliali umani. Regola reti che controllano la differenziazione, la segnalazione dei recettori ormonali e l’omeostasi metabolica, inclusa l’interazione tra le vie dei recettori degli androgeni e degli estrogeni e la modulazione dell’attività degli enhancer. Attraverso i suoi effetti sull’identità cellulare e sull’output trascrizionale, un’alterata funzione di FOXA1 è stata collegata a cambiamenti degli stati di proliferazione e differenziazione osservati in molteplici tipi di tumore e in disturbi associati al sistema endocrino. FOXA1 è quindi ampiamente utilizzato come modello per lo studio del rimodellamento della cromatina, della selezione degli enhancer e della regolazione trascrizionale dipendente dal contesto.

HNF-3α Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FOXA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FOXA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FOXA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FOXA1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.