HNF-3α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400743-ACT

FOXA1 (HNF-3α) é um fator de transcrição pioneiro da família forkhead que se liga à cromatina compactada para estabelecer paisagens regulatórias acessíveis e coordenar programas de expressão gênica específicos de linhagem. Em tecidos epiteliais humanos, ele integra a sinalização de receptores hormonais com redes transcricionais que controlam diferenciação, metabolismo e progressão do ciclo celular, incluindo amplo crosstalk com vias de receptores nucleares, como a transcrição dependente dos receptores de estrogênio e andrógeno. A atividade de FOXA1 influencia a seleção de enhancers e o remodelamento da cromatina, moldando processos de desenvolvimento e homeostase no fígado, pulmão, pâncreas e epitélio mamário. A expressão desregulada de FOXA1 ou perfis alterados de ligação à cromatina são frequentemente estudados em cânceres dependentes de hormônios e em outras doenças caracterizadas por identidade epitelial perturbada e reprogramação transcricional.

HNF-3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HNF-3α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HNF-3α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HNF-3α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HNF-3α em células tumorais com expressão de FOXA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.