Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400735-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HMG-1/HMGB1 Double-Nickase-Plasmid (h) und HMG-1/HMGB1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HMGB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HMG-1/HMGB1: sc-518191
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGB1 (HMG-1) kodiert ein hochkonserviertes, chromatinassoziiertes DNA-bindendes Protein, das die DNA krümmt und Nukleoproteinkomplexe organisiert und dadurch Transkription, Replikation, Rekombination und DNA-Reparatur beeinflusst. Im Zellkern ist HMGB1 an Signalwegen zur Aufrechterhaltung der Genomstabilität beteiligt, darunter die Basenexzisionsreparatur und Antworten auf Doppelstrangbrüche; seine Freisetzung in den Extrazellulärraum kann hingegen als schädigungsassoziiertes molekulares Muster (DAMP) wirken, das die angeborene Immunsignalgebung moduliert. Über Interaktionen mit Rezeptoren wie RAGE und TLRs verknüpft HMGB1 zellulären Stress mit Entzündungsprogrammen, die Tumormikroumgebungen und Gewebeschadensantworten prägen. Eine dysregulierte HMGB1-Aktivität und -Lokalisation wurde mit Krebsbiologie, Autoimmunität und entzündlichen Pathologien in Verbindung gebracht und stützt seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zu Chromatindynamik und Immunmetabolismus.
HMG-1/HMGB1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HMGB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HMGB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HMGB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HMGB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.