Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HMG-1/HMGB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400735-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HMG-1/HMGB1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (h) e il HMG-1/HMGB1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HMGB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HMG-1/HMGB1 Antibody (D-3): sc-518191
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HMG-1/HMGB1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400735-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMG-1/HMGB1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400735-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGB1 (HMG-1) codifica una proteina altamente conservata, associata alla cromatina e in grado di legare il DNA, che ne induce la curvatura e organizza complessi nucleoproteici, influenzando trascrizione, replicazione, ricombinazione e riparazione del DNA. Nel nucleo, HMGB1 partecipa a vie deputate alla stabilità del genoma, inclusi il base excision repair e le risposte alle rotture a doppio filamento, mentre il suo rilascio extracellulare può agire come DAMP (damage-associated molecular pattern) modulando la segnalazione dell’immunità innata. Attraverso interazioni con recettori quali RAGE e i TLR, HMGB1 collega lo stress cellulare a programmi infiammatori che modellano il microambiente tumorale e le risposte al danno tissutale. Un’attività e una localizzazione di HMGB1 deregolate sono state associate alla biologia del cancro, all’autoimmunità e a patologie infiammatorie, sostenendone l’impiego come nodo meccanicistico negli studi sulla dinamica della cromatina e sull’immunometabolismo.
HMG-1/HMGB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HMGB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HMGB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HMGB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HMGB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.