HLA-DMα Double Nickase Plasmid (h): sc-404576-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HLA-DMα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HLA-DMα Double-Nickase-Plasmid (h) und HLA-DMα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HLA-DMA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HLA-DMα: sc-134356
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HLA-DMα Double Nickase Plasmid (h) | sc-404576-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-DMα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404576-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DMA kodiert die HLA-DM-Alpha-Kette, ein nicht-klassisches MHC-Klasse-II-Molekül, das in späten endosomalen/lysosomalen Kompartimenten antigenpräsentierender Zellen ein Heterodimer mit HLA-DMB bildet. HLA-DM katalysiert den Peptidaustausch auf MHC-Klasse II, indem es CLIP von HLA-DR/DP/DQ entfernt und die Beladung mit hochaffinen Peptiden stabilisiert, wodurch es das Immunopeptidom formt, das CD4+-T-Zellen präsentiert wird. Diese Aktivität verknüpft HLA-DMA mit Signalwegen der Antigenverarbeitung und -präsentation, dem endosomalen Transport und der Aktivierung der adaptiven Immunantwort. Genetische Variation oder veränderte Expression innerhalb der HLA-Klasse-II-Region, einschließlich Komponenten des HLA-DM-Systems, wird mit Immunfehlregulation und einer erhöhten Anfälligkeit für autoimmune und entzündliche Krankheitsphänotypen in Verbindung gebracht.
HLA-DMα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HLA-DMA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HLA-DMA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HLA-DMA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HLA-DMA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.