HLA-DMα Plasmide Double Nickase (h): sc-404576-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HLA-DMα Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HLA-DMα Double Nickase Plasmid (h) e il HLA-DMα Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HLA-DMA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HLA-DMα Antibody (NB-B33): sc-134356
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HLA-DMα Plasmide Double Nickase (h) | sc-404576-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-DMα Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404576-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DMA codifica la catena alfa di HLA-DM, una molecola non classica dell’MHC di classe II che forma un eterodimero con HLA-DMB nei compartimenti endosomiali tardivi/lisosomiali delle cellule presentanti l’antigene. HLA-DM catalizza lo scambio dei peptidi sull’MHC di classe II rimuovendo CLIP da HLA-DR/DP/DQ e stabilizzando il caricamento di peptidi ad alta affinità, contribuendo a plasmare l’immunopeptidoma presentato alle cellule T CD4+. Questa attività collega HLA-DMA alle vie di processamento e presentazione dell’antigene, al traffico endosomiale e all’attivazione dell’immunità adattativa. La variazione genetica o l’espressione alterata nella regione HLA di classe II, inclusi i componenti del sistema HLA-DM, è associata a disregolazione immunitaria e a una maggiore suscettibilità a fenotipi di malattie autoimmuni e infiammatorie.
HLA-DMα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HLA-DMA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HLA-DMA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HLA-DMA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HLA-DMA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.