Histamine H4 Receptor Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402430

Panoramica

HRH4 codifica il recettore H4 dell’istamina (H4R), un GPCR accoppiato a Gi/o espresso prevalentemente nei compartimenti ematopoietici e delle cellule immunitarie, dove rileva l’istamina per regolare la chemiotassi, il rilascio di citochine e la segnalazione dipendente dal calcio. L’attivazione del recettore sopprime l’attività dell’adenilato ciclasi, modula i livelli di cAMP e si interfaccia con reti di segnalazione associate a MAPK e PI3K che modellano la migrazione dei leucociti e il tono infiammatorio. L’attività di HRH4 contribuisce al traffico delle cellule immunitarie e all’infiammazione associata alle barriere, collegando la segnalazione istaminergica a processi allergici e infiammatori. Una segnalazione H4R deregolata è stata studiata in contesti quali asma, dermatite, prurito e più in generale patologie immuno-mediate, in cui vengono spesso valutate alterazioni dipendenti dal recettore nelle risposte alle chemochine e nel reclutamento dei leucociti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Histamine H4 Receptor (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HRH4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HRH4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HRH4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Histamine H4 Receptor.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HRH4 per lo studio della segnalazione di Histamine H4 Receptor, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HRH4 critici per la funzione di Histamine H4 Receptor
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HRH4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Histamine H4 Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Histamine H4 Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HRH4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Histamine H4 Receptor Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Histamine H4 Receptor (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HRH4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HRH4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.