HIF PHD3 Plasmide Double Nickase (m): sc-431083-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HIF PHD3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HIF PHD3 Double Nickase Plasmid (m) e il HIF PHD3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Egln3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HIF PHD3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-431083-NIC | 20 µg | $410.00 |
Egln3 nel topo codifica HIF PHD3 (EGLN3), una prolil-idrossilasi dipendente da 2-ossoglutarato/Fe(II) che funge da sensore dell’ossigeno idrossilando le subunità HIF-α, promuovendone l’ubiquitinazione mediata da VHL e la degradazione proteasomiale. Attraverso questa regolazione, PHD3 modula i programmi trascrizionali indotti dall’ipossia che controllano la glicolisi, la segnalazione angiogenica, le risposte eritropoietiche, l’adattamento mitocondriale e la sopravvivenza cellulare in condizioni di bassa tensione di ossigeno. Egln3 è indotto trascrizionalmente dall’ipossia e integra segnali provenienti dallo stato metabolico e dalle specie reattive dell’ossigeno per determinare ampiezza e durata dell’attivazione della via di HIF. Una disregolazione del signaling EGLN3/HIF è stata associata in letteratura alla biologia tumorale, allo stress tissutale legato all’ischemia, al rimodellamento vascolare polmonare e ai microambienti infiammatori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dell’omeostasi dell’ossigeno.
HIF PHD3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Egln3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Egln3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Egln3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Egln3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.