HESX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409466-ACT

HESX1 (homeobox gene expressed in ES cells 1) codifica un repressore trascrizionale homeobox “paired-like” essenziale per la definizione del pattern del prosencefalo anteriore precoce e del primordio ipofisario. Opera all’interno di reti trascrizionali dello sviluppo che integrano la segnalazione SHH, WNT e BMP per controllare la specificazione del destino cellulare, la formazione dei confini tissutali e la proliferazione dei progenitori durante l’embriogenesi. HESX1 regola programmi di linea nel neuroectoderma e nell’ectoderma orale, contribuendo a coordinare l’organogenesi e lo sviluppo dell’asse endocrino. Un’attività di HESX1 deregolata è implicata nell’ipopituitarismo congenito e nelle malformazioni della linea mediana cerebrale, a supporto del suo impiego come gene modello per studiare il controllo trascrizionale nello sviluppo umano e i meccanismi di malattia.

HESX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HESX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HESX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HESX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HESX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HESX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HESX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HESX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HESX1 nelle cellule tumorali con espressione di HESX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.