Hemoglobin α1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420800

Panoramica

Hba-a1 codifica la subunità α1 dell’emoglobina murina, un componente fondamentale del tetramero di emoglobina adulta che lega l’eme e consente il trasporto reversibile dell’ossigeno negli eritrociti. La sua espressione è strettamente coordinata durante l’eritropoiesi con i geni della β-globina e con gli enzimi della biosintesi dell’eme, collegando Hba-a1 alla regolazione dei geni della globina, alla gestione del ferro e alla maturazione dei globuli rossi. L’alterazione del dosaggio dell’α-globina perturba l’assemblaggio dell’emoglobina e l’equilibrio redox, favorendo un’eritropoiesi inefficace e fenotipi di stress emolitico che modellano caratteristiche dell’α-talassemia e della biologia delle anemie correlate. In quanto gene altamente espresso e ristretto a una specifica linea cellulare, Hba-a1 è comunemente utilizzato per studiare l’architettura regolatoria del locus dell’α-globina e i meccanismi che governano la differenziazione eritroide.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Hemoglobin α1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Hba-a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Hba-a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Hba-a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Hemoglobin α1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Hba-a1 per lo studio della segnalazione di Hemoglobin α1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Hba-a1 critici per la funzione di Hemoglobin α1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Hba-a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Hba-a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Hemoglobin α1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Hemoglobin α1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Hba-a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Hba-a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.