Plasmide CRISPR/Cas9 KO Hemoglobin α1 (m): sc-420800

Présentation

Hba-a1 code la sous-unité α1 de l’hémoglobine murine, un composant central du tétramère d’hémoglobine adulte qui se lie à l’hème et permet le transport réversible de l’oxygène dans les érythrocytes. Son expression est étroitement coordonnée au cours de l’érythropoïèse avec les gènes de la β‑globine et les enzymes de biosynthèse de l’hème, ce qui relie Hba-a1 à la régulation des gènes de globine, à la gestion du fer et à la maturation des globules rouges. Une perturbation du dosage de l’α‑globine altère l’assemblage de l’hémoglobine et l’équilibre rédox, favorisant une érythropoïèse inefficace et des phénotypes de stress hémolytique qui reproduisent certains aspects de l’α‑thalassémie et de la biologie des anémies apparentées. En tant que gène fortement exprimé et restreint à une lignée, Hba-a1 est couramment utilisé pour étudier l’architecture régulatrice du locus de l’α‑globine et les mécanismes qui gouvernent la différenciation érythroïde.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Hemoglobin α1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hba-a1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hba-a1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hba-a1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Hemoglobin α1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hba-a1 pour l'étude de la signalisation de Hemoglobin α1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hba-a1 essentiels à la fonction de Hemoglobin α1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hba-a1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Hemoglobin α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Hemoglobin α1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hba-a1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Hemoglobin α1 plasmide HDR (m) et le Hemoglobin α1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hba-a1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hba-a1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.