HCN2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405074

Panoramica

HCN2 codifica il canale 2 attivato dall’iperpolarizzazione e modulato dai nucleotidi ciclici (hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 2), una subunità che forma il poro delle correnti pacemaker Ih/If e che collega l’iperpolarizzazione di membrana al flusso entrante di cationi. Integrando la dipendenza dal voltaggio con la segnalazione dei nucleotidi ciclici, HCN2 modella l’eccitabilità ritmica, regola il potenziale di membrana a riposo e influenza i pattern di scarica dei potenziali d’azione nei neuroni e nel tessuto di conduzione cardiaca. L’attività di HCN2 interseca le vie GPCR–cAMP e reti più ampie di canali ionici che controllano l’integrazione sinaptica e la regolazione autonomica. In letteratura, una funzione o un’espressione deregolata di HCN2 è stata associata ad alterazioni dell’eccitabilità neuronale e a fenotipi di conduzione rilevanti per disturbi quali epilessia, dolore neuropatico e una maggiore suscettibilità alle aritmie cardiache.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HCN2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HCN2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HCN2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HCN2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HCN2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HCN2 per lo studio della segnalazione di HCN2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni HCN2 critici per la funzione di HCN2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HCN2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HCN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HCN2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HCN2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HCN2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HCN2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HCN2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HCN2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.