Haspin Plasmide Double Nickase (m): sc-420703-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Haspin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Haspin Double Nickase Plasmid (m) e il Haspin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Gsg2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Haspin Plasmide Double Nickase (m) | sc-420703-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Haspin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-420703-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Gsg2** codifica Haspin, un’atipica chinasi serina/treonina che coordina la dinamica dei cromosomi in mitosi fosforilando l’istone H3 alla treonina 3, una modifica che favorisce il reclutamento del complesso dei passeggeri cromosomici e supporta una corretta coesione e segregazione delle cromatidi sorelle. Attraverso questo asse di fosforilazione H3T3, Haspin si integra con reti di segnalazione centromeriche che coinvolgono l’attività di Aurora B, il controllo del checkpoint del fuso e la stabilità degli attacchi tra cinetocoro e microtubuli. L’alterazione della regolazione mitotica dipendente da Haspin può indurre instabilità cromosomica e aneuploidia, collegando la funzione di Gsg2/Haspin a vie ampiamente rilevanti per il mantenimento del genoma e lo stress proliferativo. Di conseguenza, Gsg2 è frequentemente studiato nella regolazione del ciclo cellulare, nel crosstalk della fosforilazione della cromatina e nei modelli meccanicistici della fedeltà mitotica nelle cellule dei mammiferi.
Haspin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Gsg2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Gsg2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Gsg2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Gsg2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.