Haptoglobin Plasmide Double Nickase (h): sc-401468-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Haptoglobin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Haptoglobin Double Nickase Plasmid (h) e il Haptoglobin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Haptoglobin α Antibody (C-8): sc-376893
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Haptoglobin Plasmide Double Nickase (h) | sc-401468-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Haptoglobin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401468-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HP codifica l’aptoglobina, una glicoproteina secretoria di fase acuta che si lega con alta affinità all’emoglobina libera per limitare il danno ossidativo guidato dall’eme e preservare la biodisponibilità di ossido nitrico a livello vascolare. Il complesso aptoglobina–emoglobina viene rimosso principalmente dai macrofagi che esprimono CD163, collegando HP ai programmi di “scavenging” dell’eme, gestione del ferro e risoluzione dell’immunità innata durante lesioni tissutali e infiammazione. Attraverso questi processi, HP si intreccia con il controllo dello stress ossidativo, la polarizzazione dei macrofagi e la segnalazione infiammatoria associata al complemento. Alterazioni dell’espressione o del genotipo di HP sono state studiate in contesti di emolisi e infiammazione cronica, incluse patologie cardiometaboliche e vascolari, in cui il carico ossidativo e l’attivazione immunitaria sono variabili sperimentali chiave.
Haptoglobin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.