GSTM3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404418-ACT

La glutatione S-transferasi mu 3 (GSTM3) è un enzima citosolico di detossificazione di fase II che catalizza la coniugazione del glutatione con xenobiotici elettrofili e con prodotti reattivi della perossidazione lipidica, contribuendo all’omeostasi redox cellulare. Limitando l’accumulo di intermedi reattivi, GSTM3 influenza le risposte allo stress ossidativo, l’integrità mitocondriale e i processi di segnalazione a valle legati all’infiammazione e alla sopravvivenza cellulare. Variazioni nell’espressione o nell’attività di GSTM3 sono state associate a differenze interindividuali nel metabolismo degli xenobiotici e nella suscettibilità al danno ossidativo nei tessuti con elevata esposizione ambientale. Come parte della più ampia rete del metabolismo del glutatione, GSTM3 è frequentemente studiata nel contesto della gestione dei tossici, del metabolismo dei farmaci e dei programmi trascrizionali di adattamento allo stress.

GSTM3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GSTM3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GSTM3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GSTM3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GSTM3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GSTM3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GSTM3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GSTM3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GSTM3 nelle cellule tumorali con espressione di GSTM3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.