GRO1 Plasmide Double Nickase (m): sc-420697-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GRO1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GRO1 Double Nickase Plasmid (m) e il GRO1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Cxcl1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GRO1 Antibody (S-19): sc-80516
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GRO1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420697-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Cxcl1** codifica la chemochina **GRO1** (nota anche come **KC**), una chemochina CXC **ELR+** secreta che si lega a **CXCR2** per promuovere la chemiotassi, l’adesione e l’attivazione dei neutrofili nei siti di lesione tissutale o infezione. La segnalazione di GRO1 si integra con le reti di citochine infiammatorie e con vie a valle come **NF-κB** e **MAPK**, contribuendo a modulare il reclutamento dei leucociti, le risposte endoteliali e i gradienti chemokinici locali. Un’espressione deregolata di **Cxcl1** è spesso studiata in modelli di infiammazione acuta e cronica, nell’infiltrazione mieloide associata ai tumori e nel rimodellamento tissutale, dove un traffico neutrofilico alterato può influenzare l’angiogenesi e la segnalazione del microambiente. Queste caratteristiche rendono **Cxcl1** un bersaglio utile per analizzare la migrazione delle cellule dell’immunità innata e il crosstalk infiammatorio nei sistemi murini.
GRO1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cxcl1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cxcl1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cxcl1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cxcl1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.