GRIN1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405452

Panoramica

GPRIN1 (G protein regulated inducer of neurite outgrowth 1) codifica una proteina citoplasmatica arricchita nei neuroni che si associa a complessi di segnalazione di membrana per accoppiare le proteine G attivate al rimodellamento del citoscheletro. È implicata nell’estensione dei neuriti, nella dinamica del cono di crescita e nella plasticità sinaptica attraverso la regolazione di processi dipendenti dall’actina e di eventi di segnalazione prossimali al recettore. GPRIN1 è stata collegata allo sviluppo neuronale e a vie legate all’eccitabilità ed è studiata nel contesto di fenotipi neuroevolutivi e di meccanismi neurodegenerativi, in cui alterazioni dell’architettura dei neuriti e della funzione sinaptica contribuiscono alla biologia della malattia. Queste proprietà rendono GPRIN1 un bersaglio utile per analizzare l’accoppiamento tra segnalazione e struttura in modelli neuronali umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GRIN1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GPRIN1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GPRIN1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GPRIN1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GRIN1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GPRIN1 per lo studio della segnalazione di GRIN1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GPRIN1 critici per la funzione di GRIN1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GPRIN1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GRIN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GRIN1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GPRIN1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GRIN1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GRIN1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GPRIN1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GPRIN1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.