Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR172A (h): sc-405622

Présentation

SLC52A2 code la protéine humaine de transport de la riboflavine GPR172A (RFVT2), un transporteur de la membrane plasmique qui assure l’entrée cellulaire de la riboflavine (vitamine B2), précurseur des cofacteurs flaviniques essentiels FMN et FAD. En maintenant les réactions d’oxydo‑réduction dépendantes des flavoprotéines, le métabolisme oxydatif mitochondrial et la défense antioxydante, GPR172A soutient des voies telles que le transport d’électrons, l’oxydation des acides gras et, plus largement, l’homéostasie énergétique cellulaire. Une altération du transport de la riboflavine perturbe l’activité des enzymes dépendantes des flavines et est associée à une dysfonction neurométabolique. La variation génétique de SLC52A2 est liée à des syndromes de déficit en transporteur de la riboflavine touchant les nerfs périphériques et le fonctionnement du système nerveux central, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du transport des nutriments et des réponses au stress mitochondrial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR172A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC52A2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC52A2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC52A2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR172A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC52A2 pour l'étude de la signalisation de GPR172A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC52A2 essentiels à la fonction de GPR172A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC52A2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR172A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR172A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC52A2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR172A plasmide HDR (h) et le GPR172A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC52A2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC52A2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.