GPR172A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405622

Panoramica

SLC52A2 codifica la proteina umana trasportatrice della riboflavina GPR172A (RFVT2), un trasportatore di membrana plasmatica che media l’assorbimento cellulare della riboflavina (vitamina B2), precursore essenziale dei cofattori flavinici FMN e FAD. Sostenendo le reazioni redox dipendenti dalle flavoproteine, il metabolismo ossidativo mitocondriale e le difese antiossidanti, GPR172A supporta vie quali il trasporto degli elettroni, l’ossidazione degli acidi grassi e, più in generale, l’omeostasi energetica cellulare. L’alterazione del trasporto di riboflavina compromette l’attività degli enzimi flavino-dipendenti ed è associata a disfunzioni neurometaboliche. Le varianti genetiche in SLC52A2 sono correlate a sindromi da deficit del trasportatore della riboflavina che interessano i nervi periferici e la funzione del sistema nervoso centrale, rendendolo rilevante per studi sul trasporto dei nutrienti e sulle risposte allo stress mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR172A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC52A2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC52A2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC52A2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GPR172A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC52A2 per lo studio della segnalazione di GPR172A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC52A2 critici per la funzione di GPR172A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC52A2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GPR172A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GPR172A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC52A2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GPR172A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GPR172A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC52A2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC52A2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.