GPR142 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-415656

Übersicht

GPR142 kodiert den G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor 142, einen orphanen GPCR der Klasse A, der in metabolisch relevanten Geweben angereichert ist und mit der Nährstoffsensorik in Verbindung steht. Nach Aktivierung koppelt GPR142 an heterotrimere G‑Proteine, um Second‑Messenger‑Signalwege und calciumabhängige Pfade zu regulieren, die die Hormonausschüttung und die übergeordnete metabolische Homöostase beeinflussen. Transkriptions- und genetische Studien haben GPR142 mit endokrinen und metabolischen Phänotypen assoziiert, darunter Signalwege, die für die Glukoseregulation und die Funktion pankreatischer Inseln relevant sind. Als Zelloberflächenrezeptor stellt er einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um GPCR‑Signalübertragung, Ligandenentdeckung und rezeptorgetriebene Transkriptionsprogramme zu untersuchen.

Das GPR142 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GPR142-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GPR142-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GPR142 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GPR142-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GPR142-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GPR142-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GPR142-Exone abzielen, die für die GPR142-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GPR142-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GPR142 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GPR142 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GPR142-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GPR142 HDR-Plasmid (h) und GPR142 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GPR142-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GPR142-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.