GPR105 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-405954-LAC

P2RY14 (GPR105) codifica un GPCR purinergico accoppiato a Gi che rileva UDP-zuccheri extracellulari come l’UDP-glucosio e l’UDP-galattosio, collegando il rilascio di zuccheri nucleotidici alla segnalazione immunitaria ed epiteliale. L’attivazione del recettore in genere sopprime il cAMP e può modulare i programmi MAPK/ERK e chemiotattici, influenzando il reclutamento dei leucociti, le risposte citochiniche e l’infiammazione associata alle barriere. L’attività di GPR105 interseca la segnalazione purinergica di pericolo in contesti di stress tissutale ed esposizione microbica, rendendolo rilevante per studi sulle reti infiammatorie e sulla comunicazione nel microambiente tumore–sistema immunitario. Alterazioni dell’espressione di P2RY14 e dell’accoppiamento delle sue vie di segnalazione sono state associate a risposte mieloidi ed epiteliali deregolate, sostenendo l’interesse per indagini in modelli di immunologia, fibrosi e biologia del cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR105 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di P2RY14 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale GPR105 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione P2RY14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di GPR105. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo P2RY14 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.