Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402413-NIC

GPX3 codifica la glutatione perossidasi 3, un selenoenzima secreto che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi lipidici utilizzando il glutatione come donatore di elettroni, limitando lo stress ossidativo extracellulare. Modulando le specie reattive dell’ossigeno nel microambiente, GPX3 influenza vie di segnalazione sensibili allo stato redox e processi quali l’infiammazione, il rimodellamento della matrice extracellulare e la sopravvivenza cellulare. Un’alterata espressione di GPX3 è stata associata a fenotipi legati allo stress ossidativo ed è spesso studiata in contesti che includono la disfunzione metabolica, la biologia cardiovascolare e la biologia tumorale. GPX3 rappresenta quindi un nodo utile per analizzare come la capacità antiossidante extracellulare plasmi l’omeostasi redox e le reti di segnalazione a valle.

Glutathione Peroxidase 3/GPX3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GPX3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GPX3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GPX3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GPX3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.