Glutathione Peroxidase 1/GPX1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400631-ACT

GPX1 kodiert Glutathionperoxidase 1, ein zytosolisches Selenoenzym, das Wasserstoffperoxid und organische Hydroperoxide unter Verwendung von Glutathion reduziert und dadurch oxidative Schäden an Proteinen, Lipiden und DNA begrenzt. Durch die Kontrolle des intrazellulären Redoxzustands beeinflusst GPX1 die Signalgebung reaktiver Sauerstoffspezies, den Glutathionstoffwechsel sowie stressresponsive Signalwege, die die mitochondriale Funktion, Apoptose und inflammatorische Signalübertragung prägen. Eine veränderte GPX1-Expression oder -Aktivität wurde mit oxidativen Stress-Phänotypen in der Krebsbiologie, bei Neurodegeneration, Stoffwechselstörungen und in der kardiovaskulären Forschung in Verbindung gebracht. Als weit verbreitetes antioxidatives Enzym dient GPX1 als nützlicher Knotenpunkt, um zu untersuchen, wie die Redoxhomöostase Zellschicksalsentscheidungen und adaptive Stressantworten moduliert.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GPX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GPX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GPX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Glutathione Peroxidase 1/GPX1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GPX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Glutathione Peroxidase 1/GPX1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Glutathione Peroxidase 1/GPX1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GPX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.