Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400631-ACT

GPX1 codifica la glutatione perossidasi 1, un selenoenzima citosolico che riduce il perossido di idrogeno e gli idroperossidi organici utilizzando il glutatione, limitando così il danno ossidativo a proteine, lipidi e DNA. Regolando il tono redox intracellulare, GPX1 influenza la segnalazione mediata dalle specie reattive dell’ossigeno, il metabolismo del glutatione e le vie di risposta allo stress che modellano la funzione mitocondriale, l’apoptosi e la segnalazione infiammatoria. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di GPX1 sono state associate a fenotipi di stress ossidativo osservati in ambiti che spaziano dalla biologia dei tumori alla neurodegenerazione, dalla disfunzione metabolica alla ricerca cardiovascolare. In quanto enzima antiossidante ampiamente espresso, GPX1 rappresenta un nodo utile per analizzare come l’omeostasi redox moduli le decisioni sul destino cellulare e le risposte adattative allo stress.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GPX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Glutathione Peroxidase 1/GPX1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GPX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GPX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Glutathione Peroxidase 1/GPX1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GPX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Glutathione Peroxidase 1/GPX1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Glutathione Peroxidase 1/GPX1 nelle cellule tumorali con espressione di GPX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.