GLTSCR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409913-ACT

GLTSCR1 (glioma tumor suppressor candidate region gene 1) codifica una proteina nucleare implicata nella regolazione della trascrizione e in processi associati alla cromatina che influenzano il controllo del ciclo cellulare e i programmi di differenziamento. Le interazioni riportate con i macchinari trascrizionali ed epigenetici suggeriscono un ruolo nel coordinare gli stati di espressione genica e nel mantenere l’organizzazione nucleare. Un’alterata espressione di GLTSCR1 o la sua compromissione genomica è stata associata a loci legati al cancro, incluse regioni rilevanti per il glioma, a supporto del suo impiego come modulatore dipendente dal contesto di programmi trascrizionali oncogenici. Di conseguenza, GLTSCR1 è di interesse per lo studio del rimaneggiamento delle vie di segnalazione proliferative, della regolazione della cromatina e delle reti di espressione genica responsiva allo stress.

GLTSCR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GLTSCR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GLTSCR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GLTSCR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GLTSCR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GLTSCR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GLTSCR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GLTSCR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GLTSCR1 nelle cellule tumorali con espressione di GLTSCR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.