GlcAT-S Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408633

Panoramica

B3GAT2 codifica la glucuroniltransferasi S (GlcAT-S), una glicosiltransferasi residente nel Golgi che trasferisce acido glucuronico a specifici accettori carboidratici durante la maturazione dei glicani. Questa attività contribuisce alla biosintesi e al rimodellamento dei glicoconiugati di superficie cellulare e della matrice extracellulare, influenzando la processazione delle glicoproteine, le strutture carboidratiche associate ai proteoglicani e, più in generale, i programmi di segnalazione e adesione dipendenti dalla glicosilazione. Modellando la composizione dei glicani, GlcAT-S può modulare l’organizzazione dei recettori, le interazioni cellula-cellula e gli eventi di legame alla matrice, centrali per l’omeostasi tissutale e la differenziazione cellulare. Vie di glicosilazione disregolate che coinvolgono B3GAT2 sono state studiate nel contesto di alterazioni della comunicazione cellulare e delle risposte allo stress, rilevanti per molteplici fenotipi associati a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GlcAT-S (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene B3GAT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del B3GAT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto B3GAT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GlcAT-S.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di B3GAT2 per lo studio della segnalazione di GlcAT-S, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni B3GAT2 critici per la funzione di GlcAT-S
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di B3GAT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GlcAT-S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GlcAT-S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus B3GAT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GlcAT-S Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GlcAT-S (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia B3GAT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio B3GAT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.