GHRH-R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404197-ACT

GHRHR codifica il recettore dell’ormone di rilascio dell’ormone della crescita (GHRH-R), un recettore accoppiato a proteina G di classe B espresso prevalentemente nei somatotrofi ipofisari e in altri tessuti sensibili agli stimoli endocrini. In seguito al legame con il GHRH, il GHRH-R attiva la segnalazione Gs/adenilato ciclasi, aumentando i livelli di cAMP e attivando programmi trascrizionali dipendenti da PKA/CREB che supportano la sintesi e la secrezione dell’ormone della crescita. Questo recettore interagisce anche con vie più ampie di omeostasi endocrina, inclusa la regolazione dell’asse IGF-1 e i processi metabolici e di sviluppo a valle. Alterazioni della segnalazione di GHRHR sono state associate a disturbi della regolazione dell’ormone della crescita e sono state investigate in contesti di disfunzione endocrina, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici delle reti di segnalazione ormonale.

GHRH-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GHRHR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GHRH-R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GHRHR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GHRHR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GHRH-R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GHRHR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GHRH-R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GHRH-R nelle cellule tumorali con espressione di GHRHR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.