GH Plasmide Double Nickase (m): sc-420548-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GH Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GH Double Nickase Plasmid (m) e il GH Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Gh. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GH Antibody (B-10): sc-515021
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GH Plasmide Double Nickase (m) | sc-420548-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Gh del topo codifica l’ormone della crescita (GH), un fattore endocrino di origine ipofisaria che regola la crescita somatica postnatale, la ripartizione dei nutrienti e l’omeostasi metabolica. La segnalazione del GH viene avviata dal legame con il recettore dell’ormone della crescita e dalla successiva attivazione di JAK2/STAT5, con ulteriori interazioni (cross-talk) con le vie PI3K–AKT e MAPK che influenzano programmi trascrizionali in fegato, muscolo, tessuto adiposo e osso. Nei modelli sperimentali, alterazioni dell’attività dell’asse del GH modulano la produzione di IGF-1, la sensibilità all’insulina, la mobilizzazione dei lipidi e il rimodellamento scheletrico, fornendo collegamenti meccanicistici ai fenotipi di crescita e ai tratti associati alle malattie metaboliche. La perturbazione di Gh viene quindi utilizzata per studiare la regolazione endocrina dello sviluppo, del metabolismo e delle reti geniche specifiche di tessuto.
GH Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Gh nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Gh. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Gh. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Gh interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.