Ggta1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420545

Panoramica

Ggta1 codifica la galattosiltransferasi 1 α-1,3, un enzima glicosiltransferasico localizzato nell’apparato di Golgi che catalizza il trasferimento di galattosio per generare l’epitopo Galα1-3Gal su glicoproteine e glicolipidi. Modellando le strutture terminali dei glicani, Ggta1 influenza la maturazione delle proteine, la glicosilazione di membrana e le interazioni cellula–cellula o cellula–matrice, con possibili effetti sul riconoscimento immunitario e sulla segnalazione infiammatoria. Nel topo, l’attività di Ggta1 è rilevante per studi sulla biologia degli xenoantigeni e sulle risposte mediate da complemento/anticorpi, e rappresenta un modello per comprendere i meccanismi immunitari dipendenti dalla glicosilazione. La disfunzione di questo enzima è quindi utile per indagare come gli epitopi glicani regolino il legame ai recettori, la compatibilità tissutale e le vie immunitarie a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ggta1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ggta1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ggta1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ggta1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ggta1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ggta1 per lo studio della segnalazione di Ggta1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ggta1 critici per la funzione di Ggta1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ggta1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ggta1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ggta1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ggta1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ggta1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ggta1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ggta1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ggta1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.