GDPD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405288

Panoramica

GDPD3 (glycerophosphodiester phosphodiesterase domain containing 3) è una glicerofosfodiesterasi umana implicata nel catabolismo dei fosfolipidi e nel rimodellamento dei glicerofosfolipidi, processi che modellano la composizione delle membrane e la segnalazione derivata dai lipidi. Idrolizzando i glicerofosfodiesteri, GDPD3 può influenzare i pool cellulari di metaboliti che supportano il traffico di membrana, l’omeostasi degli organelli e reti più ampie del metabolismo lipidico. Un’alterata regolazione del metabolismo dei glicerofosfolipidi è frequentemente associata a cambiamenti nella proliferazione, nell’adattamento allo stress e nella segnalazione correlata al sistema immunitario, rendendo GDPD3 un nodo rilevante per studi meccanicistici sulla riprogrammazione metabolica. Modifiche dell’espressione e dell’attività di enzimi lipidici, incluso GDPD3, sono state riportate in diversi contesti rilevanti per la malattia, a supporto dell’indagine sul suo contributo alla disfunzione dell’omeostasi lipidica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GDPD3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GDPD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GDPD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GDPD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GDPD3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GDPD3 per lo studio della segnalazione di GDPD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GDPD3 critici per la funzione di GDPD3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GDPD3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GDPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GDPD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GDPD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GDPD3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GDPD3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GDPD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GDPD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.