Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
GCN5 Plasmide Double Nickase (m): sc-420512-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GCN5 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GCN5 Double Nickase Plasmid (m) e il GCN5 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Kat2a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GCN5 Antibody (A-11): sc-365321
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GCN5 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420512-NIC | 20 µg | $410.00 |
Kat2a codifica per GCN5, una acetiltransferasi delle lisine che deposita marcature di acetilazione degli istoni come H3K9ac e H3K14ac, favorendo una cromatina aperta e l’attivazione trascrizionale. Nelle cellule di topo, GCN5 opera all’interno di complessi coattivatori di tipo SAGA e ATAC, coordinando la trascrizione mediata dall’RNA polimerasi II con il rimodellamento della cromatina durante la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA e i programmi di differenziamento. L’attività di Kat2a/GCN5 si interseca con reti di regolazione genica dello sviluppo e dell’ematopoiesi e influenza vie legate al controllo del destino cellulare. Una disregolazione dell’acetilazione della cromatina che coinvolge GCN5 è stata associata a fenotipi proliferativi e a stati trascrizionali alterati rilevanti per la biologia del cancro e del neurosviluppo, supportando studi meccanicistici sulla regolazione epigenetica.
GCN5 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Kat2a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Kat2a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Kat2a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Kat2a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.