GCN5 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420512-ACT

Il gene murino **Kat2a** codifica **GCN5**, una lisina acetiltransferasi che acetila l’istone H3 (inclusi H3K9 e H3K14) per favorire l’accessibilità della cromatina e l’attivazione trascrizionale. Come componente centrale di complessi coattivatori multimerici quali **SAGA** e **ATAC**, GCN5 integra segnali a monte con programmi di espressione genica dipendenti dalla RNA polimerasi II che controllano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress. L’attività di Kat2a influenza la dinamica di enhancer e promotori, la risposta al danno al DNA e la regolazione dei geni metabolici attraverso un’acetilazione coordinata degli istoni e la coattivazione di fattori di trascrizione. Un controllo epigenetico dipendente da GCN5 deregolato è stato associato a proliferazione aberrante e a specificazione di linea cellulare anomala, rendendo Kat2a un nodo utile per modellare meccanismi guidati dalla cromatina in stati cellulari rilevanti per la malattia.

GCN5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Kat2a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GCN5 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Kat2a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Kat2a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GCN5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Kat2a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GCN5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GCN5 nelle cellule tumorali con espressione di Kat2a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.