GCDFP-15 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404430-ACT

PIP codifica GCDFP-15 (proteina inducibile dalla prolattina), una glicoproteina secreta espressa in modo marcato negli epiteli associati alle ghiandole apocrine e regolata dalla segnalazione degli ormoni steroidei. GCDFP-15 partecipa a interazioni proteiche extracellulari ed è comunemente utilizzata come marcatore molecolare degli stati di differenziazione epiteliale, riflettendo programmi trascrizionali legati alla responsività ormonale. I suoi pattern di espressione vengono spesso valutati in studi sul tessuto mammario e su altri tessuti ghiandolari, dove livelli alterati di PIP/GCDFP-15 correlano con cambiamenti nella biologia dei sottotipi tumorali e nelle caratteristiche di linea cellulare. In quanto fattore secreto, GCDFP-15 supporta anche le indagini sulla segnalazione del microambiente e sui readout di vie associate a biomarcatori.

GCDFP-15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PIP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

GCDFP-15 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PIP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PIP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di GCDFP-15. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PIP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da GCDFP-15 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via GCDFP-15 nelle cellule tumorali con espressione di PIP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.