GATA4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400122-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- GATA4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il GATA4 Double Nickase Plasmid (h) e il GATA4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira GATA4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: GATA4 Antibody (G-4): sc-25310
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
GATA4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400122-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GATA4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400122-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GATA4 codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco che si lega ai motivi GATA per regolare programmi genici che controllano la morfogenesi cardiaca, la differenziazione dei cardiomiociti e lo sviluppo di organi derivati dall’endoderma. In collaborazione con cofattori quali NKX2-5, TBX5 e le proteine della famiglia FOG, GATA4 integra input di segnalazione che includono le vie BMP, WNT e MAPK per coordinare la specificazione di linea e il rimodellamento dei tessuti. Alterazioni del dosaggio o della sequenza di GATA4 possono perturbare le reti trascrizionali che governano lo sviluppo del cuore e del tratto gastrointestinale, e la disregolazione dell’attività degli enhancer dipendenti da GATA4 è stata collegata a difetti cardiaci congeniti e a cambiamenti dell’espressione genica associati alla cardiomiopatia. In quanto regolatore nodale della trascrizione associata alla cromatina, GATA4 è ampiamente utilizzato per studiare i circuiti regolatori dei geni dello sviluppo e il controllo del destino cellulare.
GATA4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus GATA4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di GATA4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di GATA4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con GATA4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.