Gas1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404384-ACT

GAS1 umano (growth arrest specific 1) codifica una proteina di superficie cellulare ancorata tramite GPI che modula la segnalazione dei morfogeni e il controllo del ciclo cellulare, con ruoli di primo piano nella definizione dei pattern di sviluppo e nella regolazione della proliferazione. Gas1 può influenzare l’attività della via di Hedgehog attraverso interazioni con ligandi e recettori alla membrana plasmatica, collegando segnali extracellulari a programmi trascrizionali che guidano differenziamento e arresto della crescita. Un’espressione alterata di GAS1 è stata associata a una deregolazione della segnalazione Hedgehog e a cambiamenti nelle decisioni di destino cellulare, processi spesso studiati nel neurosviluppo, nell’omeostasi tissutale e nella biologia dei tumori. In quanto regolatore localizzato alla membrana, GAS1 è inoltre rilevante per studiare l’organizzazione dei recettori, le soglie di attivazione del segnale e il crosstalk tra vie dipendente dal contesto.

Gas1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di GAS1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Gas1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus GAS1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione GAS1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Gas1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus GAS1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Gas1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Gas1 nelle cellule tumorali con espressione di GAS1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.