galectin-8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424987

Panoramica

Il gene murino Lgals8 codifica la galectina-8, una lectina legante β-galattosidi a ripetizioni in tandem che riconosce i glicani presenti su proteine della superficie cellulare e della matrice extracellulare, regolando l’adesione cellulare, la migrazione e la segnalazione dipendente dalle integrine. La galectina-8 funziona come sensore di danno legandosi ai glicani dell’ospite esposti su endomembrane danneggiate, promuovendo l’autofagia selettiva e coordinando le risposte immunitarie innate allo stress intracellulare e all’infezione. Attraverso il crosslinking mediato da lectine e la segnalazione, modula le reti di citochine infiammatorie e l’omeostasi cellulare, intersecandosi con vie che controllano endocitosi, dinamica del citoscheletro e traffico vescicolare. Un’attività deregolata della galectina-8 è stata associata ad alterazioni degli stati infiammatori, al rimodellamento legato alla fibrosi e alla biologia del microambiente tumorale, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione immunitaria e sulla patologia tissutale in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO galectin-8 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Lgals8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Lgals8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Lgals8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina galectin-8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Lgals8 per lo studio della segnalazione di galectin-8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Lgals8 critici per la funzione di galectin-8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Lgals8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal galectin-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal galectin-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Lgals8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal galectin-8 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR galectin-8 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Lgals8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Lgals8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.