GABA_A Rθ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406766

Panoramica

GABRQ codifica la subunità θ (theta) del recettore GABA\(_A\), un canale del cloruro pentamerico attivato da ligando che media la rapida neurotrasmissione inibitoria nel sistema nervoso centrale umano. Regolando l’ingresso di cloruro e l’iperpolarizzazione di membrana, i recettori GABA\(_A\) modulano l’eccitabilità neuronale, l’integrazione sinaptica e le oscillazioni di rete, e interagiscono funzionalmente con vie che controllano la dinamica del calcio, il rilascio di neurotrasmettitori e l’espressione genica dipendente dall’attività. Variazioni del tono inibitorio che coinvolgono specifiche subunità recettoriali sono associate a fenotipi neurosviluppo e neuropsichiatrici e possono influenzare la suscettibilità a disfunzioni dei circuiti legate alle crisi epilettiche e allo stress. La composizione in subunità, il traffico intracellulare e la farmacologia del recettore sono determinanti chiave della funzione delle sinapsi inibitorie, rendendo GABRQ un bersaglio utile per dissezionare i meccanismi della segnalazione GABAergica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO GABAA Rθ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GABRQ in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GABRQ insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GABRQ a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina GABAA Rθ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GABRQ per lo studio della segnalazione di GABAA Rθ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GABRQ critici per la funzione di GABAA Rθ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GABRQ per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal GABAA Rθ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal GABAA Rθ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GABRQ. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal GABAA Rθ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR GABAA Rθ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GABRQ per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GABRQ definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.