G6Pase-α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420443

Panoramica

G6pc codifica la glucosio-6-fosfatasi alfa (G6Pase-α), un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la fase finale della gluconeogenesi e della glicogenolisi idrolizzando il glucosio-6-fosfato in glucosio libero e fosfato inorganico. Nel fegato, nel rene e nell’epitelio intestinale del topo, G6Pase-α sostiene l’omeostasi glicemica durante il digiuno e si integra con le vie che controllano il turnover del glicogeno, la produzione epatica di glucosio e il metabolismo dei carboidrati localizzato nel RE. L’alterazione dell’attività di G6Pase-α è collegata a livello meccanicistico a fenotipi di accumulo di glicogeno e di disregolazione metabolica, rendendo G6pc un bersaglio chiave per lo studio della gestione del glucosio e delle risposte allo stress epato-metabolico. I modelli G6pc sono inoltre impiegati per indagare il controllo trascrizionale e ormonale dei programmi gluconeogenici e la funzione degli enzimi di membrana del RE.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO G6Pase-α (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene G6pc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del G6pc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto G6pc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina G6Pase-α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di G6pc per lo studio della segnalazione di G6Pase-α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni G6pc critici per la funzione di G6Pase-α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di G6pc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal G6Pase-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal G6Pase-α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus G6pc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal G6Pase-α Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR G6Pase-α (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia G6pc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio G6pc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.