FUS/TLS Plasmide Double Nickase (h): sc-400612-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FUS/TLS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FUS/TLS Double Nickase Plasmid (h) e il FUS/TLS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FUS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FUS/TLS Antibody (4H11): sc-47711
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FUS/TLS Plasmide Double Nickase (h) | sc-400612-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FUS/TLS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400612-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FUS (FUS/TLS) codifica una proteina multifunzionale legante RNA/DNA che fa la spola tra nucleo e citoplasma per coordinare la trascrizione, lo splicing del pre‑mRNA, il trasporto dell’RNA e la dinamica dei granuli di stress. FUS partecipa alla risposta al danno al DNA, inclusa la riparazione delle rotture a doppio filamento, tramite interazioni con l’RNA polimerasi II e con fattori di riparazione che influenzano la stabilità del genoma. La disregolazione, la mislocalizzazione o l’aggregazione di FUS è associata alla biologia delle malattie neurodegenerative e un’attività alterata di FUS è stata inoltre implicata in programmi trascrizionali oncogeni. Queste proprietà rendono FUS un nodo ampiamente utilizzato per studiare il metabolismo dell’RNA, la proteostasi e la segnalazione dello stress genotossico nelle cellule umane.
FUS/TLS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FUS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FUS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FUS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FUS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.